线粒体DNA研究方法和实验方案
Mitochondrial DNA
Methods and Protocols
编 者：Jeffrey A. Stuart
出 版 社：Department of Biological Sciences
索 书 号：Q523/M684s (2)/2012/Y
藏书地点：武大外教中心
线粒体是1850年发现并于1898年命名的。线粒体由内、外两层膜包被，外膜平滑，内膜向内折叠形成嵴，两层膜之间有腔，线粒体中央是基质。基质内含有与三羧酸循环所需的全部酶类，内膜上具有呼吸链酶系及ATP酶复合体。线粒体能为细胞的生命活动提供场所，是细胞内氧化磷酸化和形成ATP的主要场所，有细胞"动力工厂" (power plant) 之称。线粒体有自身的DNA和遗传体系，但线粒体基因组的基因数量比较有限，因此，线粒体只是一种半自主性的细胞器。线粒体的直径在0.5到10微米左右。大多数真核细胞拥有线粒体，但它们各自拥有的线粒体在大小、数量及外观等方面上都有所不同。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。
本书共用三部分内容对线粒体DNA的研究方法和实验方案进行了介绍。第一部分内容包括第一至第十共十章内容，所介绍的内容包括线粒体DNA的复制、转录、翻译和呼吸链复合物的组成。介绍的内容包括动物细胞mtDNA核状小体的生化提取、二维琼脂糖凝胶电泳分析线粒体DNA、果蝇和人线粒体DNA复制蛋白的纯化策略、参与人类疾病的线粒体DNA聚合酶突变体的功能分析、人类线粒体单链DNA结合蛋白的纯化制备、评估线粒体转录因子A（TFAM）与DNA结合的方法、线粒体DNA解旋酶在人类细胞中的表达纯化和体外功能分析、人类线粒体DNA解旋酶重组蛋白的纯化策略、用提取的蛋白组分研究线粒体转录终止的方法、线粒体内的氧化磷酸化过程等。第二部分包括第十一至第十六章，主要对线粒体DNA的损伤和修复进行了阐述，主要阐述了线粒体活性氧簇的生成、超螺旋敏感的qPCR方法检测mtDNA损伤、免疫荧光法定量分析线粒体DNA中氧化形成的鸟嘌呤（8-羟鸟嘌呤）、在分离的线粒体中体外检测DNA碱基切除修复能力、哺乳动物细胞线粒体内导入修复蛋白的分子生物学实验策略、一种局限线粒体DNA而非核DNA的氧化损伤修复缺陷的细胞系的构建和功能分析等。剩下的七章对线粒体DNA的突变进行阐述，内容包括酿酒酵母中线粒体DNA的氧化损伤和突变诱变、基于变形高效液相色谱（DHPLC）异源双链分析法测定人类组织中DNA突变异质性、利用特异识别异源双链错配位点的Surveyor核酸酶快速检测未知的异质性线粒体DNA突变、用于单细胞线粒体DNA突变分析的细胞分离和收集方法、采用单细胞单分子PCR定量分析线粒体DNA体细胞突变、线粒体中DNA前体库（dNTP）的测定、构建缺乏线粒体DNA的人类细胞系等。
本书有比较详细的实验方案和研究方法，比较适合细胞器研究的科研人员，相信能够为线粒体等细胞器的研究人员提供帮助，是一本不可多得的实验指南。
书目录：
第一部分：线粒体DNA复制、转录、翻译和呼吸链复合物组装
第一章：动物细胞mtDNA核状小体的生化提取
第二章：二维琼脂糖凝胶电泳分析线粒体DNA
第三章：果蝇和人线粒体DNA复制蛋白：DNA聚合酶r和线粒体单链DNA结合蛋白的比较纯化策略
第四章：参与人类疾病的线粒体DNA聚合酶突变体的功能分析
第五章：人类线粒体单链DNA结合蛋白的纯化制备
第六章：评估线粒体转录因子A（TFAM）与DNA结合的方法
第七章：线粒体DNA解旋酶在人类细胞中的诱导表达、纯化和体外功能分析
第八章：人类线粒体DNA解旋酶重组蛋白的纯化策略
第九章：用提取的蛋白组分研究线粒体转录终止的方法
第十章：氧化磷酸化：线粒体编码蛋白的合成以及将单独的结构亚基组装成具有功能的全酶复合物
第二部分：线粒体DNA的损伤和修复
第十一章：线粒体活性氧簇的生成
第十二章：超螺旋敏感的qPCR方法检测mtDNA损伤
第十三章：免疫荧光法定量分析线粒体DNA中氧化形成的鸟嘌呤（8-羟鸟嘌呤）
第十四章：在分离的线粒体中体外检测DNA碱基切除修复能力
第十五章：利用稳定转染、瞬时转染、病毒转导及TAT-介导的蛋白转导方法靶向哺乳动物细胞线粒体导入修复蛋白
第十六章：一种局限线粒体DNA而非核DNA的氧化损伤修复缺陷的细胞系的构建和功能分析
第三部分：线粒体DNA突变
第十七章：酿酒酵母中线粒体DNA的氧化损伤和突变诱变
第十八章：基于变形高效液相色谱（DHPLC）异源双链分析法测定人类组织中DNA突变异质性
第十九章：利用特异识别异源双链错配位点的Surveyor核酸酶快速检测未知的异质性线粒体DNA突变
第二十章：用于单细胞线粒体DNA突变分析的细胞分离和收集方法
第二十一章：采用单细胞单分子PCR定量分析线粒体DNA体细胞突变
第二十二章：线粒体中DNA前体库（dNTP）的测定
第二十三章：构建缺乏线粒体DNA的人类细胞系
（王书珍）