基因敲除指南(分子生物学方法)

------Gene Knockout Protocols (Methods in Molecular Biology) 

作者:   Ralf Kühn , Wolfgang Wurst

出版:   Humana Press

索书号:   Q78/G326k(2)/2009/Y

藏书地点: 武大外教中心

 

基因敲除是指将细胞基因组中某基因去除或使基因失去活性的技术,通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性,是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的建立,使得对基因靶位时间和空间上的操作更加明确、效果更加精确、可靠,它的发展将为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究、治疗手段,具有广泛的应用前景和商业价值。现在基因敲除技术主要应用于动物模型的建立,而最成熟的实验动物是小鼠,对于大型哺乳动物的基因敲除模型还处于探索阶段。因此,《基因敲除指南》一书,详细的为读者介绍了基因敲出的理论、方法和步骤,是一本为想要了解基因敲除和操作基因敲除的人员必备的工具书。

《基因敲除指南》第二版由Humana Press出版社于2009年出版,主编为Ralf Kühn 以及Wolfgang Wurst。,同时,每一章节的内容都由来自不同国家的科学家对其进行编写,因此本书涵盖了基因敲除参与的各个领域,从概念、理论到实验方法,各种新颖独特的观点在这里得到融合、碰撞。这本书以基因敲出的性质、特点为基线,横向扩展了基因敲除参与的各种生命科学实验,是一部具有开创性的权威之作。

小鼠和人类基因组测序完成,破译每一个哺乳动物基因及其分子间的相互作用网络的功能特性已成为未来的主要挑战。小鼠作为哺乳动物研究的模式生物,在小鼠基因组中进行这些研究提供了一个方便的和重要的模型。在“基因敲除指南,第二版”中,涵盖强调了许多新的在过去7年中的技术突破,如在胚胎干细胞的基因改造、干细胞操作、遗传工程小鼠、突变表型分析等议题。并详细列举了基因敲除手段的步骤,包含简要介绍各种敲除实验所需的材料和试剂、容易出现的问题等。

《基因敲除指南》第二版具有鲜明的特色,除了保持原版的特点之外,还在原版的基础上做了以下一些改进:

1、      分子生物学实验技术本身是不断变化的,距离第一版已有七年时间,因此基因敲除技术本身也得到了新的发展,所以本书大量充实了7年来新的技术突破,为读者展现了最前沿的基因敲除技术。

2、      本书采用了大量插图,并附有彩页让读者更加明了的了解基因敲除技术,使阅读增加趣味性和可读性。

3、      本书采用了国际公认的统一的实验方法,为需要进行基因敲除实验的科学家提供了可靠的实验步骤。

4、      本书编排合理,从读者的角度考虑,循序渐进,并对25个章节进行了分段。由浅入深地介绍了目前为止所以的基因敲除概念和手段,已经取得的工程小鼠该如何进行表现分析等,内容充实合理。

本书通过对小鼠基因组进行干细胞修饰改造,再对突变体表型分析等议题让读者一步步认识基因敲除技术,对于在基因打靶和基因敲除领域感兴趣的学生、科学家、研究人员而言,本书图文并茂,是一本非常有用的工具书。

本书目录:

前言

参与者名单

彩页说明

第一章:小鼠基因突变综述

第一部分:干细胞中的基因修饰

第二章:基因重组靶位点载体的构建

第三章:基因敲除质粒和突变

第四章:干细胞染色体工程

第五章:通过单链DNA寡聚核酸研究胚胎干细胞中的基因修饰

第六章:shRNA转基因小鼠

第七章:采用甲基磺酸乙酯对小鼠胚胎干细胞进行基因诱变

第二部分:干细胞操作

第八章:在小鼠胚胎干细胞中的基因打靶

第九章:小鼠胚胎干细胞操作

第十章:干细胞细胞系的建立

第十一章:双敲除胚胎干细胞的产生

第十二章:小鼠多能胚胎干细胞在体外分化能力的分析

第十三章:通过核移植手段可能干细胞和小鼠

第三部分:可遗传性的基因工程小鼠

第十四章:小鼠囊胚的分离、显微注射及移植

第十五章:嵌合体聚合:形成干细胞、二倍体、四倍体胚胎

第十六章:通过干细胞注射,使干细胞剥离的胚胎重新进入8细胞期

第十七章:通过细菌人工染色体得到的Cre重组表达转基因小鼠

第十八章:Cre小鼠的诱导

第十九章:建立和使用Cre小鼠数据库

第二十章:采用转座子技术制作突变小鼠

第二十一章:病毒载体转基因方法

第二十二章:低温冷冻精子和体外受精

第四部分:表观分析

第二十三章:遗传背景对基因改造的影响

第二十四章:突变小鼠的病理分型

第二十五章:系统性第一表型

索引

 

 

 

(武汉大学生命科学学院研究生  刘杰)