RNA纯化与分析：样品制备、萃取、色谱——RNA Purification and Analysis: Sample Preparation, Extraction, Chromatography
作 者：Douglas T. Gjerde, Lee Hoang, David Hornby
出版社：Wiley-VCH
ISBN：978-3-527-32116-2
索书号：Q522/G539/2009/Y
藏书地点：武大外教中心
核糖核酸（Ribonucleic Acid, RNA），存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸、核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶，其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。在此过程中，转运RNA(transfer RNA, tRNA)是携带与三联体密码子对应的氨基酸残基与正在进行翻译的mRNA结合，而后核糖体RNA(ribosomal RNA, rRNA)将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。
常见的RNA主要包括：信使RNA（message RNA, mRNA）、转运RNA(transfer RNA, tRNA)、核糖体RNA(ribosomal RNA, rRNA)。其中，mRNA功能是在蛋白分子合成过程中，作为“信使”分子，将基因组DNA的遗传信息（即碱基排列顺序）传递至核糖体，使核糖体能够以其碱基排列顺序掺入互补配对的tRNA分子，进而合成正确的肽链，实现遗传信息向蛋白质分子的转化。真核生物mRNA一般由5′端帽子结构、5′端不翻译区、翻译区（编码区）、3′端不翻译区和3′端聚腺苷酸尾巴构成。原核生物mRNA一般5′端有一段不翻译区，称前导区，3′端有一段不翻译区，中间是蛋白质的编码区，一般编码几种蛋白质。rRNA是核糖体的组成成分，与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体，如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体结构会发生塌陷。核糖体中16s的rRNA3’端具有一段核苷酸序列与mRNA的前导序列互补，有助于mRNA与核糖体的结合，进而起始翻译。tRNA在蛋白质合成中作为氨基酸的载体，其能根据mRNA的遗传密码依次准确地把所携带的额氨基酸转运到核糖体中，形成多肽链。
除上述几种主要的RNA之外，RNA还有其他种类，包括：非均一核RNA（hnRNA）、小核RNA(snRNA)、核仁小RNA（snoRNA）、小细胞质RNA、microRNA、转移-信使RNA（tmRNA）、端粒酶RNA、反义RNA等。在真核生物中，转录形成的前体RNA中含有大量非编码序列，大约只有25%序列经加工成为mRNA，最后翻译为蛋白质。因为这种未经加工的前体mRNA(pre-mRNA）在分子大小上差别很大，所以通常称为不均一核RNA（hnRNA）。一部分hnRNA加工后形成mRNA转移至细胞质中，而大部分hnRNA在核内与各种特异的蛋白质形成复合体的形式存在。snRNA是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体的主要成分。snRNA一直存在于细胞核中，与40种左右的核内蛋白质共同组成RNA剪接体，在RNA转录后加工中起重要作用。scRNA主要位于细胞质内，种类较多，参与蛋白质的合成和运输。microRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA。端粒酶RNA(Telomerase RNA Component，TERC），是真核生物细胞中发现的一种非编码RNA。TERC是端粒酶的一部分，在端粒延伸过程中，TERC作为端粒继续延伸的模板，由端粒酶催化实现端粒的延长。反义RNA(antisenseRNA，asRNA），是一类能够与mRNA互补配对的单链RNA分子。细胞中引入反义RNA，可与mRNA发生互补配对，抑制mRNA的翻译。另外，asRNA还可用于RNA干扰（RNA interference,RNAi）中起始双链RNA的生成。研究表明，反义RNA参与基因表达的调控。
RNA是生物体重要的遗传物质, RNA的提取是分子生物学的基础实验, 对于cDNA文库构建、荧光定量PCR、RT-PCR、Northern杂交等下游分子生物学实验来说, 都需要质量好的, 完整性高的。文库构建、荧光定量PCR、RT-PCR、Northern杂交等下游分子生物学实验来说, 都需要质量好的, 完整性高的RNA。常用的RNA分离方法有以下几种：①异硫氰酸胍—酚法，其原理是：GIT与β-巯基乙醇共同作用抑制RNA酶活性，而GIT与十二烷基肌氨酸钠作用使蛋白质变性，释放RNA，此外，在酸性环境下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性，进而与RNA分离开来。此方法所提取的RNA纯度高且完整性好，适用于纯化mRNA，逆转录及构建cDNA文库等。②TRIzol法，此法可以直接从细胞或组织中提取总RNA。TRIzol试剂在破碎溶解细胞的同时还能保持RNA的完整性，再加入氯仿离心后，样品出现分层——水层核有机层，RNA存在于水层，通过异丙醇可沉淀下来。③苯酚法，将样品置于含有十二烷基磺酸钠的缓冲液中，加入等体积的水饱和酚，剧烈振荡并离心，形成水相和有机相，即可分离RNA和蛋白质。④密度梯度离心法，利用胍盐/氯化铯将细胞抽提样品进行密度梯度离心，蛋白质在最上层，DNA在中间，RNA沉于最底层，此方法可以制备较大量纯度的天然RNA。分离纯化后的RNA的检测、分析主要方法有：①利用分光光度计测定在260nm和280nm下的OD值；②通过Northern-Blot杂交进行检测；③RT-PCR检测。
《RNA纯化与分析：样品制备、萃取、色谱》一书是于2009年由Wiley-VCH出版社所出版，作者是Douglas T. Gjerde, Lee Hoang, David Hornby。
《RNA纯化与分析：样品制备、萃取、色谱》一书主要阐述的是以下几方面的内容：RNA提取，分离和分析；生物学和化学的RNA；RNA分离：基质，功能组，机制和控制；RNA的提取和分析；RNA色谱；RNA色谱，分离和分析；RNA结构-功能探测等。《DNA加合物：形成、检测和诱变》旨在为涉足该领域的相关人员全面的讲解RNA纯化与分析的知识及相关的技术手段。
《RNA纯化与分析：样品制备、萃取、色谱》作为一本专业介绍RNA纯化与分析的书籍，其内容全面充实，语言通俗易懂，此外，还具有以下的特点：
1、本书系统全面的介绍了包括RNA分离、提取、纯化、分析，以及RNA结构与功能的相关知识，为涉足生物学及医学领域的相关人员提供了宝贵的参考资料，有助于大家全面、系统的了解相关技术。
2、书中还附有丰富的图片资料，更加生动、形象、直观，有助于读者对知识的理解和记忆。
3、在本书的最后，将出现的专业词汇都罗列出来，并予以注解，大大方便了大家对阅读过程中对相关的的专业术语的认知。
总之，《RNA纯化与分析：样品制备、萃取、色谱》作为一本专业介绍RNA纯化与分析的书籍，为涉足相关领域的人员全面的讲解RNA纯化与分析的知识，是一本值得为想要涉足该领域的人员推荐的专业书籍。
本书目录：
1、RNA提取，分离和分析
2、生物学和化学的RNA
3、RNA分离：基质，功能组，机制和控制
4、RNA的提取和分析
5、RNA色谱
6、RNA色谱，分离和分析
7、RNA结构-功能探测