Preservation of Cells: A Practical Manual
作者：Allison Hubel
索书号：Q25/H877/2018/Y
ISBN: 978-1-118-98984-5
藏书地点：武大外教中心
细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂——一定终浓度的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。
哺乳动物细胞已成为具有多种应用能力的现代劳动工具，如生产治疗蛋白、病毒疫苗、抗体和治疗剂。用于治疗的细胞必须妥善储存，以满足释放细胞前的安全和质量控制测试。根据冻存细胞的下游应用，可以使用多种方法来保存细胞。在低温下保存细胞的一种方法，称为玻璃化，可避免冰的形成。冻存步骤的每个元素都是基于科学原理的，这些原理可以用于合理地设计特定的步骤，以实现细胞的下一步使用的预期。
低温贮藏培养基是内部配制的，或从各种来源购买的预制配方，具有良好的成分特征和已知的储存方法和稳定性。大多数低温贮藏溶液有三种基本成分:载体溶液、低温保护剂(CPAs)和蛋白质来源。冷冻保存液的质量控制措施有助于提高冷冻方案的可重复性。开发一种引入和去除低温保护溶液的方法是低温保存协议的重要步骤。渗透和生化毒性是两个独立的损伤机制，可发生在引入，培养和去除低温保存溶液的步骤中。通常用三种不同类型的容器，吸管，小瓶和袋子来存储低温保存溶液。
试样的冻存采用两种基本方法:速冻和无冻结。受控速率制冷机通过降低以受控方式冷冻样品的冷冻室的温度来冷却样品。一般来说，当需要较高的存活率和可再生的解冻后恢复时，可以使用控制率冷冻方案。对于资源受限的环境，或者在总体回收和再现性不是很关键的情况下，钝化冻结方案也是适用的。被动冷冻是将样品冷冻保存并将其置于低温环境中。与控制速率方案一样，被动冷冻的温度随时间的变化应记录并作为产品生产记录的一部分保存。完成冷冻程序后，样品应从冷冻装置转移到存储设施。
本书旨在帮助读者了解冷冻保存前处理程序对细胞状态的影响，以及减轻细胞应激的策略。预冷冻过程中有两种不同类型的应激，包括因切断组织的血液供应而引起的缺氧和与组织的酶消化相关的应激。预冷冻处理还可能导致细胞受到外来物质的污染，这些外来物质包括病毒、细菌、支原体、真菌、立克次体、原生动物、寄生虫和传染性海绵状脑炎病原体。细胞在处理过程中监测细胞凋亡或代谢变化的早期迹象可作为细胞亚致死应激的标记。预冻鉴定包括对下列物质的测定:个体、遗传稳定性、计数、纯度和偶然感染因子。
《细胞的保存：一本实践手册》一书于2018年由Wiley Blackwell出版，作者是Allison Hubel。
《细胞的保存：一本实践手册》一书中，专家研究人员介绍了细胞冷冻保存的相关知识，讨论的主题主要包括预冻加工与特征，低温保存溶液的制定和引进，冻存步骤，冷冻细胞的储存和运输，复苏和复苏后处理，低温保存溶液的制定和引进，复苏后评估以及不同种类细胞冻存的具体操作步骤。《细胞的保存：一本实践手册》一书从各个方面讲解了细胞冷冻保存以及冷冻后复苏的具体步骤和相关注意事项，旨在为需要细胞操作的研究人员提供简明易懂的介绍以及方法技术指导。
《细胞的保存：一本实践手册》一书作为细胞生物学专业研究读物，观点新颖独到，内容饱满详实、语言浅显易懂，除此之外，还包括一些其他的特点：
1、本书不仅详细介绍了细胞冻存从预冻步骤到冻存再到复苏及复苏后的处理的具体流程，以及不同种细胞冻存液的配制，还详细介绍了各种不同类型的哺乳细胞的具体冻存方法。为细胞生物学、干细胞生物学、组织工程和再生医学的研究人员,实验室技术人员和学生提供了指导。
2、本书清楚地解释了保存方案制定过程中每一个步骤背后的原因及其背后的科学原理，可以为当传统的冷冻保存方法不适合某一特定细胞类型或应用时，提供另一种保存方式。使更多的组织改善解冻恢复的状态以保护细胞。
3、本书可以帮助那些开发新的细胞冻存协议或改进现有协议的人。这本书向读者提供了开发或调试细胞保存协议所需的工具。全面描述每一个步骤的相关元素，包括相关的科学原则，任何参与细胞冻存的人都可以使用它。
总的说来，《细胞的保存：一本实践手册》一书为想要了解T淋巴细胞与免疫反应的分子机制的人员提供了清晰的导读路径，作为细胞生物学领域的一本前沿研究图书，是一本值得为想要涉足该领域的人员推荐的专业书籍。
本书目录：
前言
致谢
术语表
第1章 介绍
第2章 预冻加工与特征
第3章 低温保存溶液的制定和引进
第4章 冻存步骤
第5章 冷冻细胞的储存和运输
第6章 复苏和复苏后处理
第7章 低温保存溶液的制定和引进
第8章 复苏后评估
操作步骤
介绍
内皮细胞悬浮冷冻保存
从全血中冷冻保存外周血单核细胞
人体脂肪干细胞的低温保存
红细胞冷冻保存
卵母细胞的低温保存
卵母细胞玻璃化和升温
造血祖细胞及其他细胞产物的运输
造血祖细胞的低温保存
造血祖细胞的复苏
T细胞的处理和低温保存
冷冻保存T细胞的复苏和回流
索引
胡萌欣 武汉大学生命科学学院 博士