Introduction
to Modeling in Physiology and Medicine
电子显微镜中的原位杂交
作者：Gérard Morel,Annie Cavalier,Lynda Williams
出版：CRC Press
索书号：Q3/M839/2019/ Y
ISBN: 978-0-367-65537-8
藏书地点:武大外教中心
探针由标记的核酸（DNA或RNA）组成，其核苷酸序列与靶核酸互补。探针的核苷酸序列与靶标的检测序列匹配反义。本章讨论不同类型的探针，如双链DNA、单链DNA、合成DNA和RNA。它讨论了探头的优缺点。还讨论了选择要使用的探头类型的标准。本章回顾了聚合酶链反应 （PCR） 扩增、PCR 方案、非对称 PCR 扩增和非对称 PCR 扩增方案。它讨论了体外转录，沉淀技术和纯化原理。
本章讨论技术的选择，如后包埋技术、预包埋技术和冷冻组织技术。每种技术都有自己的优点和缺点。回顾了每种技术的原理。本章提供了用于超微结构原位杂交的不同方法的汇总表，并讨论了用于选择超微结构原位杂交的三种技术之一的标准。
用于确保原位杂交中保留形态学和核酸的技术与用于经典电子显微镜的技术相似。这包括在接近无菌的条件下对组织进行取样和固定。生物材料的固定，包括培养物中的组织（器官，活检等）或细胞（单层，悬浮液），必须使用适当的技术进行，例如后包埋技术，预包埋技术和冷冻切片。所有类型的生物材料如组织和细胞都可以固定。本章讨论固定组织的原理、条件和参数。不同类型的固定剂如交联剂和化学固定剂及其优点和缺点被描述出来。本章讨论细胞悬液/细胞单层。还讨论了灌注固定和浸入固定的不同步骤的总结。
嵌入亲水性树脂可以同时测试多个组织样品。原位杂交可以在类似于免疫细胞化学的条件下进行。原位包埋后组织的治疗与免疫细胞化学的治疗相似。本章讨论包埋技术的原理，丙烯酸树脂的类型和特性以及树脂的选择。描述了嵌入低丙烯酸K4M树脂，LR白色树脂和单丙烯酸树脂的原理和方案。本章讨论了超微切除术、脱蛋白、核酸靶标变性以及免疫细胞化学可视化原理。
在组织嵌入树脂之前，在组织上进行杂交。然后，可以分别用光学和电子显微镜观察半薄和超薄切片。本章讨论切割振动切片的参数，振动切片的储存以及渗透稳定，脱蛋白，预杂化和杂交的原则。它还讨论了不同类型的环氧树脂。回顾了振动切片的固定，嵌入和可视化。该章还回顾了放射性杂交种，抗原杂交种和超薄切片的可视化。
为了增加核酸对探针的可及性，可以避免包埋组织。为了切割超薄切片，组织通过冷冻硬化。通过这种方法获得的切片被称为冷冻组织的超薄切片。本章讨论冷冻保护及其原理。冷冻保护限制了组织液体冻结时晶体的形成。溶液中的一些分子通过无定形形式（即，不结晶）变成固体。本章回顾了不同的低温保护剂，低温剂，冷冻方法，如程序冷冻。冷冻超薄切开术涉及切割冷冻组织的超薄切片。本章讨论脱蛋白、寡核苷酸探针和杂交方案。
本章演示了在光学显微镜水平上使用与电子显微镜相同的技术进行原位杂交的潜在用途。半薄切片上的原位杂交可以被认为是超薄切片上原位杂交的初步步骤（光学显微镜和电子显微镜之间的中间步骤）。半薄切片可以在原位杂交的可视化之前或之后切割，这取决于诸如未嵌入组织技术和预包埋技术等方法。本章讨论不同类型的混合动力车，如稳定混合动力车、不稳定混合动力车和部分混合动力车。描述了不同类型的标记。本章回顾了杂交种的可视化，放射自显影乳液的选择以及不同类型杂交种的协议。它讨论了半薄冷冻切片，半薄树脂切片和杂交后处理。本章讨论信号/背景比、不同的探针标准和样品的预处理。它还讨论了探针的灵敏度/特异性和样品的杂交。信号的变化也使用不同的标准进行讨论。
在绝大多数情况下，原位杂交用于在组织水平上定位mRNA物种，或在染色体水平上定位DNA。这些方法通常最好通过光学显微镜来完成。然而，在某些情况下，在亚细胞水平上定位核酸变得很重要 - 这把我们带入了电子显微镜的领域。细胞内核酸的分布可能是其功能的重要组成部分。不同核酸的分配，制造，运输和加工对细胞的功能至关重要，并且才刚刚开始被理解。
在绝大多数情况下，原位杂交用于在组织水平上定位mRNA物种，或在染色体水平上定位DNA。这些方法通常最好通过光学显微镜来完成。然而，在某些情况下，在亚细胞水平上定位核酸变得很重要 - 这把我们带入了电子显微镜的领域。细胞内核酸的分布可能是其功能的重要组成部分。不同核酸的分配，制造，运输和加工对细胞的功能至关重要，并且才刚刚开始被理解。
在绝大多数情况下，原位杂交用于在组织水平上定位mRNA物种，或在染色体水平上定位DNA。这些方法通常最好通过光学显微镜来完成。然而，在某些情况下，在亚细胞水平上定位核酸变得很重要 - 这把我们带入了电子显微镜的领域。细胞内核酸的分布可能是其功能的重要组成部分。不同核酸的分配，制造，运输和加工对细胞的功能至关重要，并且才刚刚开始被理解。
用于电子显微镜（EM）的原位杂交使我们能够可视化分子的这种亚细胞编排。EM方法在某些方面与其他原位协议不同，但原则本质上是相同的。允许标记的探针在超薄切片（通常是塑料或冷冻切片）中与靶核酸杂交，然后用标记物（通常是胶体金）检测结合探针。在本章中，我们概述了EM原位杂交的效用和挑战，以及我们使用和开发的方案，用于在各种细胞中定位多种RNA，包括动物，植物，原生生物和细菌。
原位杂交研究在重组DNA技术出现之前就开始了，因此探针的产生仅限于可以通过常规生化方法从细胞中收获的高丰度分子（例如，核糖体RNA，卫星DNA，病毒DNA）。分子克隆，聚合酶链反应（PCR）和寡核苷酸生物合成已经消除了这些边界，并且对可以构建的探针几乎没有限制。此外，新的探针检测系统不断得到开发和完善，再次扩展了该技术的应用。本节简要介绍了原位杂交的一些不同应用，并推测了该技术的未来作用。
在更高水平的核酸动力学，mRNA行为中，我们再次发现原位杂交的许多应用。在细胞核中以斑点模式观察到新生的聚（A）RNA，其中一部分被证明形成对核功能显然很重要的持久结构。在snRNA（mRNA处理剪接体的组分）的研究中显示了类似的模式，进一步建立在我们对核功能区室化的知识的基础上。在转录本处理之后，原位杂交跟踪了聚（A）RNA通过核孔的通道。除了细胞核之外，许多研究正在阐明细胞质中特异性mRNA分选的复杂过程。通常可见mRNA的非同源分布，其中一些显示功能相关的靶向。细胞骨架通过来自细胞整个装载的原位杂交数据与mRNA分选过程有关。
《电子显微镜中的原位杂交》一书于2019年由CRC Press出版，作者是Gérard Morel,Annie Cavalier,Lynda Williams。
《电子显微镜中的原位杂交》一书中，研究人员介绍了电子显微镜中的原位杂交的基本概念，重点是最近的技术发展，讨论的主题主要包括九个章节。《电子显微镜中的原位杂交》一书从各个方面讲解了电子显微镜中的原位杂交的基础内容和研究方法，旨在为想要进一步研究电子显微镜中的原位杂交的研究人员提供简明易懂的介绍以及方法技术指导。
《电子显微镜中的原位杂交》一书作为电子显微镜中的原位杂交专业研究读物，观点新颖独到，内容饱满详实、语言浅显易懂，除此之外，还包括一些其他的特点：
1、本书分为九个章节，既讲解了电子显微镜中的原位杂交的基础知识，还讲解了深入研究电子显微镜中的原位杂交的应用范围，是一本应用性很强的书籍，对于想要学习研究电子显微镜中的原位杂交的研究人员来说是一本很有意义的指导书籍。
2、每个章节都是由相关领域的专业人士所撰写，因此，本书讲解既详细又专业，读者能够从中了解到电子显微镜中的原位杂交相关的专业知识以及最新的前沿进展。
总的说来，《电子显微镜中的原位杂交》一书为想要了解电子显微镜中的原位杂交的研究方法的人员提供了清晰的导读路径，作为电子显微镜中的原位杂交领域的一本前沿研究图书，是一本值得为想要涉足该领域的人员推荐的专业书籍。
本书目录：
第 1 章|46 页
探针
第 2 章|18 页
方法论原则
第 3 章|22 页
样品制备
第 4 章|64 页
后嵌入技术
第 5 章|56 页
预嵌入技术
第6章|46 页
冷冻组织技术
第 7 章|48 页
半薄型材
第 8 章|36 页
控制和问题
章9章|52 页
结果示例
林岚 武汉大学生命科学学院 博士研究生